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熒光定量基因擴增儀的性能檢定方法

更新時間:2025-05-27      點擊次數:719
  熒光定量基因擴增儀的操作流程也體現了其便捷性,科研人員只需將待測樣品與熒光標記物混合后加入反應體系,設置好反應條件與參數,儀器便能自動完成PCR擴增與熒光檢測的全過程。實驗結束后,計算機軟件會自動生成熒光信號隨反應周期變化的圖表,并計算出目標DNA的初始拷貝數或相對含量。這種自動化、智能化的操作方式,不僅大大提高了實驗效率,還降低了人為誤差,確保了實驗結果的準確性與可靠性。
 
  此外,熒光定量基因擴增儀還具有廣泛的應用領域。在基礎研究領域,它被廣泛應用于基因表達分析、基因突變篩查、遺傳連鎖分析等方面;在臨床診斷中,它則成為病原體檢測、腫瘤早期診斷及分型、遺傳病診斷等的重要工具。同時,在食品安全、環境監測等領域,也發揮著越來越重要的作用。
熒光定量基因擴增儀
 
  熒光定量基因擴增儀的檢定方法:
 
  1.外觀及工作狀態檢查
 
  -用目測法檢查儀器應有下列標志,儀器名稱、型號、制造廠名、出廠編號;儀器應有制造計量器具許可證標志(CMC)及編號,使用說明書、合格證、附件等技術文件齊全。
 
  -檢查光電轉換器(如光電倍增管)應無漏氣、漏油,響應時間、靈敏度、穩定性等性能指標應符合規定。
 
  -檢查信號處理系統(如放大器、模數轉換器等)應工作正常,各連接線接觸良好,無短路、斷路現象。
 
  -檢查顯示系統(如顯示屏、顯示器等)應清晰、準確,無缺筆劃、亮點、暗點等缺陷,對比度、亮度調節功能正常。
 
  -檢查溫控系統應能準確地達到并穩定在設定的溫度值,溫度波動范圍應在允許范圍內。
 
  -檢查機械傳動系統(如移液臂、攪拌器等)應運行平穩、準確,無卡頓、抖動現象,定位精度應符合要求。
 
  2.性能檢定
 
  -熒光強度測量準確性:使用標準熒光物質配制一系列不同濃度的溶液,分別測量其熒光強度,繪制熒光強度與濃度的標準曲線。然后將已知濃度的待測熒光物質溶液放入儀器中測量,根據標準曲線計算出測量值與實際值之間的相對誤差,一般要求相對誤差在一定范圍內(如±5)。
 
  -線性范圍:選擇一種熒光物質,配制從低濃度到高濃度的一系列標準溶液,測量各濃度下的熒光強度,繪制熒光強度-濃度曲線。觀察曲線的線性部分所對應的濃度范圍,即線性范圍。一般要求線性范圍應覆蓋儀器聲稱的線性區間,且線性相關系數應滿足一定要求(如r≥0.99)。
 
  -重復性:對同一濃度的熒光物質溶液進行多次重復測量(一般不少于6次),計算測量結果的相對標準偏差(RSD)。重復性越好,說明儀器在相同條件下測量結果的一致性越高,一般要求RSD在一定范圍內(如≤1)。
 
  -穩定性:在一定時間內(如連續工作4小時或8小時),每隔一段時間(如30分鐘或1小時)對同一熒光物質溶液進行測量,觀察熒光強度的變化情況。計算熒光強度的平均值和相對標準偏差,以評估儀器的穩定性。一般要求熒光強度的變化在允許范圍內(如±3)。
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